Серодиагностика Y. enterocolitica у кур к.б.н. Афонюшкин В.Н., Аксенов А.Н., Арискина Ю.С.

Серодиагностика Y. enterocolitica у кур

к.б.н. Афонюшкин В.Н., Аксенов А.Н., Арискина Ю.С.


Василий Николаевич Афонюшкин, к.б.н., заведующий сектором молекулярной биологии, тел. 89231176461. E-mail: lisocim@mail.ru, ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии, Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РА

Алексей Николаевич Аксенов, старший менеджер по ветеринарным препаратам, alexey.axionov@krka.biz, ООО «КРКА-фарма»

Арискина Ю.С. OOO «Сибагротрейд»


Род
Yersinia относиться к семейству Enterobacteriaceae и включает три широко известных и патогенных для человека вида: Y. pestis, Y. pseudotuberculosis, and Y. enterocolitica. В Германии и Швеции Y. enterocolitica является наиболее часто выделяемым патогенном ассоциированным с бактериальными гастроэнтеритами [8, 9]. Y. enterocolitica вызывает также другие клинические синдромы такие как энтероколиты, острый мезентериальный лимфаденит, ложный аппендицит, постинфекционный артрит и системная инфекция [2, 5]. Считается, что наиболее частой причиной заражения человека являются продукты животного происхождения особенно мясо свиней и молочные продукты [3, 5, 8].

Иерсиниозы людей и животных крайне неравномерно распространены в мире и сельскохозяйственная птица не является исключением. Вероятно, важное значение для заболеваемости иерсиниозами имеют: эколого-климатические факторы, технологические особенности и национальные традиции в обработке продуктов питания. Так, в Иране мясо птицы контаминировано Y. enterocolitica в 18,33% случаев. При этом встречаются следующие биотипы 1A (0%), 1B (0%), 2 (18.18%), 3 (52.27%), 4 (17.42%), и 5 (12.12%), серотипы: O:3 (36.84%), O:5,27 (59.84%), O:8 (5.30%), и O:9 (0%). Например, среди выделенных из мяса птицы изолятов Y. enterocolitica серотипа O:3 встречаются следующие гены вирулентности yadA (82.60%), inv (100%), ail (95.65%), ystA (93.47%), и virF (58.69%) [6 ]. Что позволяет рассматривать мясо птицы в качестве потенциального источника иерсиниозов людей для Ирана и сопряженных с ним государств. В России, по некоторым данным, инфицированность тушек бройлеров в среднем составляет 20% однако преимущественно это непатогенные для человека биотипы. По нашим данным имеет место территориальная приуроченность иерсиниозных инфекций кур т.е. немало областей где иерсинии практически не встречаются.

Патогенность иерсиниозов вызванных Y.enterocolitica для кур мало изучена, вероятно, ввиду большей приоритетности санитарного значения данного микроорганизма. Также существует ряд факторов влияющих на реализацию патогенного потенциала иерсиний у птицы, например – высокая температура тела, широкое распространение клеточного содержания, массовое использование антибиотиков.

Оральное заражение суточных цыплят Y. enterocolitica серотипов О:3, О:8, О:9 в дозах от 8х1010 до 1.6 х1011 (КОЕ/голову) не приводило к появлению каких-либо клинических проявлений заражения или снижения веса. Однако Y. enterocolitica выделяли из печени, сердца, селезенки через 70 суток после заражения [4]. Другими авторами была невозможность колонизации кишечника Y. enterocolitica, при заражении в дозе менее чем 1х108 кое. Длительность персистенции возбудителя в организме птицы превышала 28 дней [7].

С одной стороны, такой длительный срок персистенции в организме птицы позволяет говорить о том, что птица может служить резервуаром инфекции, с другой стороны, длительное сохранение возбудителя иерсиниоза в сердце, селезенке не может не сказываться на адаптационных возможностях этих органов, что не может не проявится, в условиях промышленного птицеводства.

Тем не менее, анализ существующей научной литературы не дает оснований рассматривать Y. enterocolitica в качестве инфекционного агента вызывающего моноинфекцию у кур и снижающего их продуктивность или сохранность. С другой стороны, мы регулярно выделяем иерсиний из внутренних органов павшей птицы, на птицефабриках характеризующихся высокой частотой встречаемости гепатитов с мультифокальными некрозами (до 60-90% поражений печени на убое), у птицы родительских стад характеризующихся высокой частотой встречаемости такого дефекта скорлупы яиц как микронасечка (до 5%) Наши эпизоотологические микробиологические и серологические исследования дают нам основания считать, что существуют факторы которые могут повышать эпизоотическое значение иерсиниозов для птицефабрик РФ. К наиболее вероятным факторам следует отнести кишечные вирусные инфекции (например, флавивирусная инфекция [1.]), эймериозы и любые другие агенты нарушающие целостность слизистой кишечника.

Объектом исследования служили сыворотки крови полученные от цыплят-бройлеров двух птицефабрик локализованных к европейской части РФ.

Антитела к антигенам Y. enterocolitica определяли с использованием микропланшет сенсибилизированных видоспецифичным антигеном Y. enterocolitica по методике разработанной нами. Пробы крови были отобраны от цыплят-бройлеров (птичники №№1-6) в возрасте 35 суток (дата отбора 16-17.04.2014г. в европейской части РФ), также было исследовано 57 проб от птицы родительского стада птицефабрики находящейся в регионе Западной Сибири (дата отбора проб -21.10.2013г., птичник №7). Птичники №№ 1-4 и №№5-6 и №7 принадлежали трем разным птицефабрикам неблагополучным в отношении иерсиниозов. Ранее нами и нашими коллегами на этих птицефабриках отмечалось наличие узелков в печени, гепатиты, продуктивное воспаление серозной оболочки кишечника у цыплят-бройлеров на убое и вскрытии без существенного снижения сохранности. У птицы родительского стада мы фиксировали сезонный (весенне-зимний и осенне-зимний) прирост частоты встречаемости гепатитов с мелкоочаговыми некрозами и гранулемами, продуктивным воспалением серозного слоя желудочно-кишечного тракта и воспаления скорлуповой зоны яйцеводов сопровождающееся также увеличением встречаемости микронасечки на скорлупе. Наличие иерсиниозов также подтверждалось результатами микробиологических исследований, культуры были патогенны для лабораторных мышей, характеризовались наличием аутоагглютинации, кальций-зависимого роста (маркеры патогенности), также в мазках отпечатках и гистологических препаратах из пораженных органов встречались неравномерно окрашенные грамотрицательные палочки.

Пробы сывороток, содержащие антитела к видоспецифичному антигену Y.enterocolitica, встречались у птицы из птичников №№ 1-3,4,6,7. Благополучными, по результатам ИФА, в отношении иерсиниоза можно считать птичник №5 (таблица 1).

Все птичники характеризовались высокими значениями коэффициента вариации по результатам тестов на уровень антител к Yersinia enterocolitica, что обусловлено неоднородностью стад по инфицированности иерсиниями в условиях естественного заражения (таблица 1, рисунок 2).

Таблица 1. Титры антител к антигенам Yersinia enterocolitica в ИФА в разных птичниках

Номера птичников

1

2

3

4

5

6

7

M+m

2032,21

+861,30

1318,11

+903,95

608,43

+429,67

231,50

+101,07

131,79

+28,83

338,79

+192,77

3904,34

+457,5

Cv, %

158,51

256,49

264,12

163,29

81,82

212,81

88,46

Удельная доля
серопозитивных проб,%

40

20

13,3

20

0

13,3

80,71

Рисунок 1. Пример ИФА на наличие антител к Y.enterocolitica в сыворотках крови кур.

Примечание: лунка А1 контрольная сыворотка с титром антител 1:10000, лунка В1 контрольная сыворотка с титром антител 1:1000, лунка С1 контрольная сыворотка с титром антител 1:100, лунка В –отрицательный контроль

Представляет интерес, что группы птицы (птичники №№1 и 2) характеризующиеся наибольшими средними значениями титров антител к Y.enterocolitica, отличаются не только наибольшими значениями инфицированности (40 и 20%, по данным ИФА), но в этих группах встречаются пробы с наивысшими значениями титров антител (11395 и 12794 соответственно). Это может быть обусловлено большим количеством возбудителя, вступившим в контакт с иммунной системой организма, и позволяет предполагать взаимосвязь между интенсивностью и экстенсивностью инфекции.

Средний уровень антител, равно как и процент серопозитивных проб, у птицы родительского стада существенно выше (таблица 1), чем во всех выборках цыплят-бройлеров, это можно объяснить длительным выращиванием птицы, что, в свою очередь, повышает вероятность заражения в течение периода выращивания. Также, вероятно, длительное выращивание родительских стад предполагает большее накопление возбудителя иерсиниоза в окружающей среде, что приводит к увеличению дозы заражения. Нельзя исключить и действие предрасполагающих факторов, вероятность проявления которых опять-таки повышается при увеличении длительности выращивания. Следует отметить – несмотря на увеличение встречаемости микронасечки и появление гепатитов с узелками, сохранность и яичная продуктивность неблагополучных по иерсиниозу родительских стад не снижалась, ущерб от данной инфекции обусловлен увеличением количества тумаков в инкубационном шкафу вследствие увеличения удельной доли микронасечки скорлупы. Также можно было бы предполагать увеличение рисков санитарного характера, таких как заражение персонала и увеличение частоты контаминации иерсиниями конечного продукта.


Рисунок 2. Множественные некротические очажки в печени у цыплят-бройлеров на убое (выделена культура иерсиний, в сыворотке крови есть антитела к возбудителю).

Рисунок 3. Сальпингит с преимущественным воспалением скорлуповой зоны яйцевода в птичнике с десятикратным приростом микронасечки (выделяли иерсиний из зоны воспаления).

Заключение: серомониторинг Y.enteroclitica у сельскохозяйственной птицы обеспечивает возможность контроля распространенности заражения или носительства цыплят-бройлеров и кур данным микроорганизмом, что может иметь значение как для выяснения роли иерсиний в развитии патологических процессов у кур и цыплят-бройлеров (узелки в печени, микронасечка яичной скорлупы, сальпингиты, продуктивные гранулематозные энтероколиты), так и может быть актуально для повышения санитарной безопасности продуктов птицеводства.


Литература

1. Афонюшкин В.Н., Рябчикова Е.И., Сильников В.Н., Аксенов А.Н., Дударева Е.В. Оценка роли флавивирусной инфекции в снижении продуктивности цыплят-бройлеров в РФ 2011-2013 гг.//Ветеринария, 2014г. ; №6; -С.

2. Bottone, E. J. Yersinia enterocolitica: overview and epidemiologic correlates. Microbes Infect. 1999. ; №1; -Р. 323-333.

3. Bucher, M., C. Meyer, B. Grötzbach, S. Wacheck, A. Stolle, and M. Fredriksson-Ahomaa. Epidemiological data on pathogenic Yersinia enterocolitica in southern Germany during 2000-2006. //Foodborne Pathog. Dis. 2008., №5; -P.273-280.

4. Nwosuh E.N, Adesiyun A.A. Experimental studies on Yersinia enterocolitica infection in chickens exposed at 1-day old.// British Poultry Science Volume 30, Issue 1, 1989 91-99

5. Neubauer, H., L. D. Sprague, H. Scholz, and A. Hensel. Yersinia enterocolitica infections. 2. Impact on human health. //Berl. Münch. Tierärztl. Wochenschr. 2001; Vol. 114; -Р. 81-87.

6. H. Momtaz, M. Davood Rahimian and F. Safarpoor Dehkordi Identification and characterization of Yersinia enterocolitica isolated from raw chicken meat based on molecular and biological techniques // J. Appl. Poult. Res. (2013) Vol.22 №1 -P. 137-145.

7. Soerjadi-Liem AS, Snoeyenbos GH, Weinack OM. Establishment and competitive exclusion of Yersinia enterocolitica in the gut of monoxenic and holoxenic chicks. //Avian Dis. 1984 Jan-Mar; Vol.28 (1) -P.256-260

8. RKI (Robert Koch Institut). 2006. Ausgewählte Zoonosen im Jahr 2005: durch Lebensmittel übertragbare bakterielle gastrointestinale Infektionen.// Epidemiol. Bull. Vol.41, -P.351-356.

9. SFOPH (Swiss Federal Office of Public Health). Infectious diseases—reports of physicians and laboratories.// Wkly. Bull. 1998. Vol.52 -p.16.